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    研域解析:酶聯(lián)免疫吸附法

    發(fā)布時間: 2020-01-16  點擊次數(shù): 1777次

    原理:可用于測定抗體,也可用于檢測杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶連接,然后通過酶與底物發(fā)生顏色反響,用于定量測定。酶聯(lián)免疫吸附法測定的對象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑: 

    ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); 

    ②酶符號的抗原或抗體(符號物); 
    ③酶效果的底物(顯色劑)。

    ELISA進(jìn)程包括:抗原吸附在固相載體上,這個進(jìn)程稱為包被,加待測抗體, 再加相應(yīng)酶符號抗體,生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。借助分光光度計的光吸收核算抗體的量。

    依據(jù)檢測意圖和操作過程不同,有以下三種類型的常用辦法:

    a、間接法  

    此法是測定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗刷后,加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測定。

    b、雙抗體夾心法  

    酶聯(lián)免疫吸附法此法常用于測定抗原。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗刷,加人酶標(biāo)板中。

    c、競爭法  

    此法可用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原,使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合;通過洗刷分離,zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

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